In ihrer Zeit als Genin war sie zusammen mit Jiraiya und Orochimaru in einem Team. Teamleiter war der Hokage der dritten Generation (Sarutobi). Im Team geriet sie in ihren Anfangsjahren häufig mit Jiraiya aneinander, und behauptete er solle sich ein Beispiel an Orochimaru nehmen, da dieser viel stärker war als er. Tsunade, Orochimaru und Jiraiya sind die einzigen Shinobi in der ganzen Welt, die den Titel "Legendärer Sannin" tragen dürfen. Dieser wurde ihnen vom Anführer des Dorfes Amegakure, Hanzō, verliehen. Grund dafür ist, dass sie in einem großen Kampf gegen ihn und seine Soldaten die einzigen Überlebenden Seitens Konoha waren und die ganze feindliche Armee getötet hatten. Hanzō war der Meinung, dass diese Leistung nicht in Vergessenheit geraten sollte und gab ihnen den Titel. Das Team trennte sich jedoch einige Zeit danach, da bekannt wurde, dass Orochimaru im Geheimen menschenverachtende Experimente durchführte.
In ihrem späteren Leben wird Tsunade zum Hokage der fünften Generation ernannt. Damit geht sie den selben Weg wie ihr Großvater und ihr ehemaliger Sensei Hiruzen. Ferner unterrichtet sie mit der Zeit auch mehrere Schülerinnen. So wurden von ihr Dans Nichte Shizune, Sakura Haruno und Ino Yamanaka zu Iryōnin ausgebildet.
Die Beziehung zwischen Tsunade und Jiraiya hat große Gemeinsamkeiten mit der von Sakura und Naruto.